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       Western Blot即免疫印迹法（蛋白质印迹法）是分子生物学、生物化学和免疫遗传学中常用的一种实验方法。与Southern Blot、Northern Bolt类似，不同的是，Southern Blot与Northern Blot检测的物质分别为DNA、RNA，Western Blot检测的是蛋白质。

原理

       ●Western Blot：采用的是聚丙烯酰胺凝胶电泳，被检测物  是蛋白质，“探针”是抗体，“显色”用标记的二抗。

      ● 经过PAGE分离的蛋白质样品，转移到固相载体（例如硝酸纤维素薄膜）上，固相载体以非共价键形式吸附蛋白质，且能保持电泳分离的多肽类型及其生物学活性不变。以固相载体上的蛋白质或多肽作为抗原，与对应的抗体起免疫反应，再与酶或同位素标记的第二抗体起反应，经过底物显色或放射自显影以检测电泳分离的特异性目的基因表达的蛋白成分。

       ● 免疫印迹法所检测的蛋白样品主要来自于人工构建的细胞株系，包括微生物与动植物细胞，也可从实验动物体获得。

       ● 将样本裂解后，采用有机溶剂或水溶法分离总蛋白后，再进行层析或点洗脱制备目的蛋白后，在蛋白中加入等量Loading Buffer煮沸变性就可以进行SDS-PAGE凝胶电泳的步骤了。

       ● SDS（十二烷基硫酸钠） 是一种离子性的界面活性剂,它有强离子性的硫酸根离子也带有疏水性的长碳链。当 SDS 与蛋白质混合时，它会以其碳链与蛋白质之疏水性胺基酸结合将蛋白质包起来，而以硫酸根离子外露与水分子作用。大多数蛋白质和 SDS 的平均结合量是 1:1.4 (以重量为单位)，而蛋白质和SDS结合后,由于 SDS 带强负价，使蛋白质原先的带电价微不足道,且每单位重量的蛋白质带电价一致，所以决定不同蛋白的泳动速率就只剩下分子大小一项因素。